Un estudio comparativo de la variabilidad de la frecuencia cardíaca inicial, la calidad del sueño y los niveles de estrés oxidativo en sujetos hipertensos versus normotensos: un estudio transversal

Estimación de malondialdehído

Coleccion de muestra

Se extrajeron tres mililitros de sangre venosa de cada sujeto de manera esterilizada de la vena cubital mediana en un vial rojo simple (BD, EE. UU.). Se permitió que la sangre completa se coagulara durante 10 minutos antes de centrifugarla a 3000 rpm durante cinco minutos para separar el suero, que luego se recogió en un tubo de microcentrífuga Eppendorf estéril (Eppendorf, Alemania) y se almacenó a -800 °C hasta el siguiente procedimiento. .

Análisis MDA

Instrumentos utilizados:

Tubos graduados de 20ml

Contenedor lleno de hielo

Centrífugo

Baño de agua hirviendo

Vórtice

Placa ELISA

Lector ELISA

Reactivos utilizados y su preparación

MDA: se requiere MDA para preparar diferentes concentraciones estándar en función de las cuales se cuantifican las muestras.

TCA: Se preparó TCA al 20 % pesando 20 g de ácido tricloroacético soluto puro en 100 ml de DDW.

H2N / A4: Se preparó ácido sulfúrico 0,05 M añadiendo 2,8 ml de ácido sulfúrico concentrado en 1 litro de DDW.

Solución de sulfato de sodio: Se preparó una solución de sulfato de sodio 2 M disolviendo 28,4 g de sulfato de sodio anhidro en 90 ml de DDW con calentamiento y agitación constantes. El volumen final adicional se lleva a 100 ml con DDW.

TBA: se preparó ácido tiobarbitúrico al 0,67% disolviendo 670 mg de TBA en 100 mL de solución de sulfato de sodio 2 M.

n-Butanol/alcohol n-butílico: Se usó alcohol n-butílico fácilmente disponible comercialmente.

Agua estéril/bidestilada

Preparación estándar

La solución estándar de MDA se preparó a partir de una solución madre de 500 µM comprada (kit de estimación EZAssay TBARS, Himedia, India).

Stock estándar de trabajo para MDA: preparado diluyendo 0,2 ml de solución madre en 10 ml de 0,05 MH2N / A4 para obtener una solución madre de trabajo de 10 µM.

Se prepararon diferentes concentraciones de estándares diluyendo el stock de trabajo de acuerdo con la siguiente tabla:

Principio de MDA

Las lipoproteínas se precipitaron de la muestra de suero mediante la adición de TCA al 20 %. El malondialdehído presente en la muestra reacciona con ácido tiobarbitúrico en sulfato de sodio para formar un complejo de color rosa. La intensidad del complejo coloreado depende directamente de la concentración de niveles de MDA presentes en la muestra de suero.

El complejo coloreado desarrollado se extrajo posteriormente en n-butanol, que finalmente se leyó para las lecturas de absorbancia a 530 nm (filtro verde) utilizando un filtro colorimétrico o un lector ELISA. El método se estandarizó usando varias concentraciones de solución estándar y se trazó una curva estándar en papel cuadriculado para medir la lectura de los resultados de la prueba.

Procedimiento de Estimación de MDA

Se colocaron tres tubos de ensayo limpios, secos y etiquetados en la gradilla de tubos de ensayo, y los siguientes se pipetearon con cuidado en los tubos respectivos como se muestra en la Tabla 7

REACTIVOS

PRUEBA (µl)

ESTÁNDAR (µl)

EN BLANCO (µl)

Suero

250

Estándar (10 μM/L)

250

Agua doblemente destilada

250

20% TCA

1250

1250

1250

Los tubos se dejaron reposar durante 10 minutos a temperatura ambiente.

A continuación, los tubos se centrifugaron a 3500 rpm durante 10 minutos.

Se decantó el sobrenadante y se procesó el precipitado con los siguientes reactivos.

0.05MHz2N / A4

1250

1250

1250

0,67 % por confirmar

1500

1500

1500

Todos los tubos se calentaron en un baño de agua hirviendo a 90OhC durante 30 minutos.

A continuación, los tubos se enfriaron en hielo.

n-butanol

2ml

2ml

2ml

Con agitación vigorosa, se obtuvieron los cromógenos resultantes.

Se realizó la separación de la fase orgánica por centrifugación a 3000rpm durante 10 min.

La fase orgánica se filtró y se pipetearon 200 µl respectivamente en diferentes pocillos de placa ELISA.

Los pocillos de la placa ELISA se mezclaron bien y se leyeron a 530 nm en el lector ELISA.

Caso de paciente pro forma

Número de participante: Nombre:

Edad/Sexo: Religión

Historia reportada por: Dirección:

Número de teléfono: Ocupación

Presentación de quejas: (con duración en orden cronológico)

HOPI:

Historial pasado: (con detalles del tratamiento y estado del resultado)

Historial de tratamiento: (incluyendo detalles de tratamientos fuera del hospital)

Antecedentes familiares y de contactos cercanos:

Historia personal:

1. Educación-

2. Casado/soltero –

3. Ocupación (ingresos mensuales, si los hubiere) –

4. Ropa (detalles de fumar/alcohol) –

5. Detalles de hábitos de higiene (por ejemplo, lavado de manos, eliminación de costura, etc.) –

6. Historial menstrual (si es mujer) –

7. Historia sexual –

Cualquier ETS – (detalles, incluida la cura)

8. Patrón de sueño y estado mental –

9. Un patrón dietético que incluya un historial alimentario detallado reciente hasta 2 días antes del inicio de los síntomas.

10 Estado de vacunación –

11 Historia de viajes –

Historia social: (incluido el estado socioeconómico, los estilos de vida circundantes, el hogar y el habitus, la ocupación)

Exploración física: (con consentimiento e higiene de manos)

1. Estado mental –

2. Aspecto general –

3. Vitales: PR – , RR – , BP – , Temp – SpO2

4. Piel – Altura: Peso: IMC:

Inspecciones

palpación

Percusión

Auscultación

5. Pecho (sistema respiratorio)

6. Pecho (cardiovascular)

7. Abdomen

8. Examen genito-urinario-rectal –

9. Examen musculoesquelético –

10 examen neurologico –

11 Investigación planificada (a enviar para todos los participantes)-

Hemograma completo

· Urea de sangre

· suero de creatinina

· Electrolitos séricos (Na, K, Cl, Ca)

· Radiografía de pecho

· ECG de 12 derivaciones

· Análisis de orina

· Glucosa plasmática

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